技術文章/ARTICLES

（1)費氏弧菌發光桿菌包被液（P H9.6碳酸鹽緩沖液） 稱取碳酸鈉0.32g、碳酸氫鈉0 .5 8 6 g ,置200ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。
(2 )磷酸鹽緩沖液（p H 7 . 4 )稱取氯化鈉8g、磷酸氫二鈉1.44g、磷酸二氫鉀0.24g，加水溶解并稀釋至500ml, 121°C滅菌15分鐘。
(3 )洗滌液（pH7.4) 量取聚山梨酯20 0.5ml，加磷酸鹽緩沖液至500ml。
(4 )稀釋液（p H 7 . 4 )稱取牛血清白蛋白0.5g，加洗滌液溶解并稀釋至100ml。
(5 )濃稀釋液稱取牛血清白蛋白l.O g , 加洗滌液溶解并稀釋至100ml。
(6 )底物緩沖液（pH 5 .0枸櫞酸-磷酸鹽緩沖液） 稱取磷酸氫二鈉（Na2HP04 . 12H20 )1 . 84g、枸櫞酸 0. 51g，加水溶解并稀釋至100ml。
(7 )底物液取鄰苯二胺8mg、30%過氧化氫30^1，溶于底物緩沖液20ml中。臨用時現配。
(8 )終止液lm o l/L硫酸溶液。
費氏弧菌發光桿菌標準品溶液的制備  按菌體蛋白質標準品說明書加水復溶，精密量取適量，用稀釋液稀釋成每lm l中含菌體蛋白質500ng、250ng、125ng、62. 5ng、31. 25ng、15. 625ng, 7. 8125ng的溶液。
供試品溶液的制備  取供試品適量，用稀釋液稀釋成每l m l中約含2 5 0 ug 的溶液。如供試品每l m l中含量小于500ug時，用濃稀釋液稀釋1倍。
測定法 取兔抗大腸桿菌菌體蛋白質抗體適量，用包被液溶解并稀釋成每lm l中含10ug 的溶液，以100ul/ 孔加至9 6孔酶標板內，4 °C放置（16~1 8小時）。用洗滌液洗板3次；用洗滌液制備1%牛血清白蛋白溶液，以200u1/孔加至酶標板內，37°C放置2 小時；將封閉好的酶標板用洗滌液洗板3 次；以100u1/孔加人標準品溶液和供試品溶液，每個稀釋度做雙孔，同時加入2 孔空白對照（稀釋液），37°C放置2 小時；用稀釋液稀釋辣根過氧化物酶（HRP)標記的兔抗大腸桿菌菌體蛋白質抗體1000倍，以100u1/ 孔加至酶標板內，37°C放置1 小時，用洗滌液洗板1 0次，以l00ul/孔加人底物液，3 7 °C避光放置4 0 分鐘，以5 0 p l /孔加入終止液終止反應。用酶標儀在波長4 9 2 n m 處測定吸光度，應用計算機分析軟件進行讀數和數據分析，也可使用手工作圖法計算。
以標準品溶液吸光度對其相應的濃度作標準曲線，并以供試品溶液吸光度在標準曲線上得到相應菌體蛋白質含量，
按以下公式計算：
供試品費氏弧菌發光桿菌菌體蛋白質殘留量（％) = (c×n)/（T×106）×100
式中 c為供試品溶液中菌體蛋白質含量，ng/ml;
     n為供試品稀釋倍數；
     T為供試品蛋白質含量，mg/ml。