技術文章/ARTICLES

①費氏弧菌發光桿菌制做選擇平板LB+25 mg/l Kan。
②核對好要轉化的質粒dna，在15 ml Falcon tube 和cuvette（電轉化用的石英樣品槽，兩面磨光，兩面磨砂）標好質粒名稱。將Falcon tube、cuvette、質粒DNA、SOC培養基按順序對應置于冰上預冷或解凍。轉化前將大腸桿菌（45 µl aliquot of E. coli DH10B Cells）置于冰上解凍（約3-5 min）。
一、將冰桶移置超凈工作臺上，取200-1000 µl、20-100 µl、0.5-10 µl 移液器（Fubbouoette）到超凈工作臺上。先用0.5-10 µl移液器取0.5-2 µl質粒DNA到大腸桿菌細胞內，再用調節到50 µl 的（20-100 µl移液器）上下吹吸數次。在冰上放置2 min。
二、用調節到50 µl 的（20-100 µl移液器）將質粒DNA和大腸桿菌細胞混合液轉移到電轉化石英樣品槽底凹槽的中央，在桌面上輕擊數次使之分散。在冰上放置1-2 min。
三、先用紙將樣品槽擦拭一下，移到2.5 kV電脈沖發生器上，同時用1000 µl移液器吸好SOC培養基，約4.5-5 sec后鳴叫聲停后，立即加入樣品槽內（吹吸一次或不吹吸）。
四、將細胞懸浮液從樣品槽中取出并加入15 ml Falcon tube，在37℃，200/min振蕩培養1 h。在樣品槽中加滿自來水，以便清洗。
五、在此期間，可制做選擇平板LB+25 mg/l Kan。
六、將培養后的轉化大腸桿菌懸液在超凈工作臺上全部倒入1.5 ml微量離心管，13000 rpm離心30 s（或到達13000 rpm后離心15 s）。用費氏弧菌發光桿菌1000 µl移液器取出大部分的上清，再用50 µl移液器全部棄掉剩余的上清，之后吸取100 µl lb培養基重新懸浮沉淀，上下吹吸數次到均勻。
七、對三角鐵焚燒滅菌，標記選擇平板，取30 µl LB培養基加入平板中心，再取重新懸浮后的轉化大腸桿菌30 µl加入平板中心。待三角鐵冷卻后，在平板上研磨，至無可見液體為止。注意三角鐵一定要冷卻，或先在無菌液的平板上研磨加速冷卻。
八、將選擇平板在37℃下培養，1天后觀察轉化效果。
九、清洗電轉化樣品槽。先用自來水吸瓶沖洗十多次，之后加入酒精，放置1 h，之后用蒸餾水沖洗數次，甩干后，費氏弧菌發光桿菌水平放置在濾紙上晾干。