技術文章/ARTICLES

青海發光桿菌成活率，判斷之形態學觀察法：

1、細胞內出現顆粒或空泡。

2、細胞內如果出現顆粒物質，表明細胞處于非健康狀態。

3、同樣，細胞內出現空泡也說明細胞處于非健康狀態。

 細胞喪失雙折射性：

    如果發生在單層細胞：一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環），則提示該細胞已經死亡，即zui終干枯死亡。

    如果發生在懸浮細胞：正常懸浮細胞清晰透明，如胞內出現顆粒或變渾濁表明細胞受損，甚至死亡。

    怎樣去除死細胞？單層培養的細胞死亡后，一般會漂浮起來，因此不需要特殊處理。

而懸浮細胞或原代培養細胞則要通過密度離心（如Ficoll梯度）方法收集死細胞。

細胞成活率檢測實驗

即刻檢測實驗——

染料柜染實驗：原理——萘黑、臺盼藍以及很多其他染料均不能透過活細胞。概要——將細胞懸液與染料混勻，在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細胞；生長液；0.25%胰酶；PBSA.非滅菌材料即：血細胞計數板；生存力染料；巴斯德吸管；顯微鏡；手執計數器。

操作步驟：

1、用胰蛋白酶消化或離心，重懸制備高深度的細胞懸液

2、取一塊干凈的血細胞計數板，將蓋玻片固定在適當位置上。

3、將一<滴細胞懸液和一滴（臺盼藍）或四滴（萘黑）染料混勻/li>

4、加至血細胞計數板的計數室中。

5、靜置1~2min（但不要放置很久，否則活細胞會受到損傷而吸收染料）。

6、將計數板置于顯微鏡下，用10倍物境找到計數網格。

7、青海發光桿菌計數細胞總及著色細胞的數目。

8、清洗血細胞計數板，放入盒內。
    3.3'-二氨基聯苯胺 片劑    100 Tablets    生物技術級    DAB SUBSTRATE TABS 5MG/240MG
    3.3'-二氨基聯苯胺 片劑        生物技術級    3,3'-DIAMINOBENZIDINE (DAB) TABLETS
    3.3'-二氨基聯苯胺 片劑    50 Tablets    生物技術級    DAB SUBSTRATE TABS 5MG/240MG
    2XYT 培養基肉湯    100G    生物技術級    2XYT MEDIUM BROTH
    2XYT 培養基肉湯    500G    生物技術級    2XYT MEDIUM BROTH
    20%葡萄糖無菌溶液    100ML    生物技術級    GLUCOSE, 20% STERILE SOLUTION
56-81-5    20%甘油無菌溶液    100ML    生物技術級    GLYCEROL, 20% STERILE SOLUTION
     dGTP 100 mM溶液, pH 7.0    40 µM    生物技術級    DGTP,100MM PH7.0 *DRYICE*
     8% GENE-PAGE PLUS, 7 M 尿素    500ML    生物技術級    GENE PAGE PLUS 8% *CLDPAK*
青海發光桿菌